番茄潰瘍病是如何檢測(cè)得出的？

番茄潰瘍病是由克雷伯氏菌屬引起的細(xì)菌性病害，具有強(qiáng)傳染性，可通過種子、土壤、灌溉水及農(nóng)事操作傳播。典型癥狀包括：幼苗莖部水漬狀病斑、成株期莖稈潰瘍裂口、葉片萎蔫卷曲、果實(shí)“鳥眼斑”及維管束變褐，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致全株枯死。

檢測(cè)技術(shù)體系：從宏觀到微觀的精準(zhǔn)識(shí)別

1. 田間癥狀診斷（初步篩查）

典型癥狀觀察：

幼苗期：子葉水漬狀病斑，莖部出現(xiàn)細(xì)小潰瘍，嚴(yán)重時(shí)幼苗萎蔫死亡。

成株期：莖稈中下部出現(xiàn)縱向裂口，分泌白色或琥珀色菌膿；葉片邊緣黃化卷曲，形成“燒邊”現(xiàn)象；果實(shí)表面出現(xiàn)黑色小點(diǎn)（鳥眼斑），周圍有白色暈圈。

根部與維管束：根部腐爛，維管束變褐，橫切莖稈可見褐色條紋。

局限性：癥狀易與細(xì)菌性斑點(diǎn)病、真菌性病害混淆，需結(jié)合其他方法驗(yàn)證。

2. 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)（精準(zhǔn)定性）

細(xì)菌分離培養(yǎng)：

樣本采集：取病株莖稈潰瘍部、葉片病斑邊緣或果實(shí)病健交界處組織。

培養(yǎng)基選擇：使用選擇性培養(yǎng)基如CMM（Clavibacter Medium）或NBY（Nutrient Broth Yeast），Cmm在CMM上形成黃色菌落，在NBY中呈桿狀、無芽孢、革蘭氏陽性。

生化鑒定：通過過氧化氫酶陽性、氧化酶陰性、明膠液化、硝酸鹽還原等生化反應(yīng)確認(rèn)菌種。

血清學(xué)檢測(cè)：

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）：利用特異性抗體檢測(cè)Cmm抗原，適用于大規(guī)模樣本篩查，靈敏度高。

免疫熒光/免疫電鏡：通過熒光標(biāo)記抗體直接觀察細(xì)菌形態(tài)，或用電鏡觀察菌體結(jié)構(gòu)。

分子生物學(xué)檢測(cè)：

PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）：使用特異性引物（如針對(duì)16S rRNA、plasmid基因）擴(kuò)增Cmm DNA片段，通過凝膠電泳或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR（qPCR）確認(rèn)。

LAMP（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增）：快速、低成本，適合田間現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，無需復(fù)雜設(shè)備。

基因測(cè)序：對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，通過BLAST比對(duì)確認(rèn)菌種，適用于新毒株或變異株鑒定。

3. 生物測(cè)定與病理學(xué)驗(yàn)證

致病性測(cè)試：將分離菌株接種健康番茄植株，觀察是否引發(fā)典型潰瘍癥狀，驗(yàn)證其致病性。

組織病理學(xué)：切片觀察維管束病變、細(xì)胞壞死及細(xì)菌侵染路徑，結(jié)合染色技術(shù)（如Gram染色）確認(rèn)細(xì)菌存在。

檢測(cè)流程與質(zhì)量控制

樣本采集與保存：無菌操作采集病株樣本，置于無菌袋或離心管中，4℃冷藏或-20℃冷凍保存，避免污染。

實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范：嚴(yán)格遵循無菌操作流程，使用消毒器械，避免交叉污染；設(shè)置陽性/陰性對(duì)照，確保實(shí)驗(yàn)可靠性。

結(jié)果判定：結(jié)合癥狀、培養(yǎng)、生化、分子及病理學(xué)結(jié)果綜合判定，必要時(shí)進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)或第三方驗(yàn)證。